技(ji)術(shu)原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats）是最新出現的(de)一種(zhong)由sgRNA指導Cas核酸(suan)酶對靶向基因進(jin)(jin)行(xing)特定DNA修(xiu)飾(shi)的(de)技術(shu)。在這一系(xi)統中，sgRNA引導序列(lie)靶定位點剪切雙鏈(lian)DNA達到對(dui)基因(yin)(yin)組DNA 進(jin)(jin)行(xing)修(xiu)飾(shi)的(de)目的(de)。CRISPR/Cas9系(xi)統能夠對(dui)小鼠(shu)基因(yin)(yin)組特定基因(yin)(yin)位點進(jin)(jin)行(xing)精確編輯，目前(qian)瑞(rui)思元已經成功將此技術(shu)應用(yong)于(yu)小鼠(shu)基因(yin)(yin)敲(qiao)除(chu)/敲(qiao)入模型制備，以及(ji)條件(jian)性敲(qiao)除(chu)（Loxp系(xi)統）模型制備。
目前瑞(rui)思元采取優化過的野生型Cas9和雙(shuang)切(qie)口(kou)Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優化過的雙(shuang)切(qie)口(kou)Cas9n(OCASn)可以將(jiang)脫(tuo)靶效應(ying)降到最低。
H11位點(dian)定點(dian)過表達
H11位(wei)(wei)點(dian)(dian)（也叫Hipp11）位(wei)(wei)于小鼠第11號(hao)染(ran)色體，是(shi) Eif4enif1與Drg1 這(zhe)兩個(ge)基(ji)因之間(jian)(jian)的(de)(de)一個(ge)位(wei)(wei)點(dian)(dian)，由于H11位(wei)(wei)點(dian)(dian)位(wei)(wei)于兩個(ge)基(ji)因之間(jian)(jian)，外(wai)(wai)源基(ji)因插(cha)入后對內源基(ji)因表達的(de)(de)影響很小，同時H11位(wei)(wei)點(dian)(dian)所在(zai)的(de)(de)Eif4enif1與Drg1這(zhe)兩個(ge)基(ji)因的(de)(de)側翼序列區(qu)域(yu)具有廣泛的(de)(de)空間(jian)(jian)和時間(jian)(jian)EST表達模式，能夠使整合在(zai)此的(de)(de)外(wai)(wai)源基(ji)因受指定啟動子的(de)(de)驅動而穩定表達。該位(wei)(wei)點(dian)(dian)的(de)(de)純合敲(qiao)入小鼠可正常發育和繁(fan)殖。
利用(yong)(yong)CRISPR/cas9系統(tong)可以在H11位點構建條件性(xing)(xing)基(ji)因過表(biao)達小鼠(shu)模(mo)型(xing)，即廣(guang)泛型(xing)強(qiang)啟動子pCAG與(yu)外源目的基(ji)因cDNA之間用(yong)(yong)loxP-stop-loxP結構隔開(kai)，只有與(yu)組織(zhi)特(te)異(yi)性(xing)(xing)Cre工具鼠(shu)交配(pei)后，才會在特(te)異(yi)細胞或(huo)組織(zhi)中表(biao)達目的基(ji)因。
運用
用于人類(lei)基因功(gong)能、蛋白功(gong)能的過(guo)表達研(yan)究
技術優勢
研發周期：4-6個月；
按(an)設(she)計精(jing)準插(cha)入(ru)；
基本(ben)保證過(guo)表達；
遺傳穩定性高；
無需篩選，直接用于分析(xi)
制備(bei)流程
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